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西方墨點法 (Western Blot)
西方墨點 (WB) 是一種基本的免疫分析技術，用於檢測細胞或組織裂解物中的蛋白質表現量。當與免疫沉澱 (IP) 結合時，西方墨點還可以顯示蛋白質於細胞內的位置、轉譯後修飾、蛋白質加工及蛋白質-蛋白質之間的相互作用。
西方墨點 (Western blot, WB) 為利用抗體來識別細胞或組織裂解液中個別蛋白質的一種技術。抗體與高度專一性的胺基酸序列（稱為抗原表位/抗原決定位）結合。由於蛋白質與蛋白質之間的胺基酸序列有所不同，因此西方墨點可用於鑑定與定量含有數千種不同蛋白質裂解物中的單一蛋白質。首先，藉由 SDS-PAGE 凝膠電泳，根據蛋白質的大小將蛋白質彼此分離。接下來，透過施加電流將蛋白質從凝膠轉漬到膜上。然後針對有興趣的目標蛋白，使用特異性之一級抗體對膜進行處理。再接著使用與酵素結合的二抗，最後添加會與二抗結合之酵素反應的受質，以偵測抗體/蛋白質複合物。
蛋白樣品製備及定量 Sample Preparation and Quantification
RIPA Cell Lysis Buffer (5X) RIPA細胞裂解液ExtractPRO Protein Extraction Reagent 全蛋白萃取試劑Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制劑混合物Phosphatase Inhibitor Cocktail 磷酸酶抑制劑混合物Protease &Phosphatase Inhibitor Cocktail 蛋白酶／磷酸酶抑制劑β-Mercaptoethanol (β-ME, 2-ME) 還原劑DTT (Dithiothreitol) 還原劑TCEP 還原劑Dual-Range BCA Protein Assay Kit BCA蛋白質定量套組Dual-Range Bradford Protein Assay Bradford蛋白質定量試劑
製膠 Polyacrylamide Gel Casting
跑膠 Loading and Running the Gel
轉漬 Transferring to the Membrane
抗體抗原反應 Blocking and antibody Incubation
Primary Antibody 一級抗體Secondary Antibody 二級抗體Western Blot Ab Signal Enhancer 抗體訊號增強劑 (WB, ELISA)Western Blot Ag Signal Enhancer 抗原訊號增強劑LuminolPen™ (for HRP system) 西方墨點冷光筆BlockPRO 1 Min Protein-Free Blocking Buffer 一分鐘遮蓋液BlockPRO Protein-Free Blocking Buffer 無蛋白西方墨點遮蓋液BlockPRO Blocking Buffer 西方墨點遮蓋液BSA (Albumin, heat shock isolation pH 7.0) 牛血清白蛋白Biomate Buffers - PBS (10X), TBS (10X) 緩衝液Biomate Wash Buffers- PBST (10X), TBST (10X) 清洗緩衝液TBS Tween-20 Buffer 清洗緩衝液PBS Tween-20 Buffer 清洗緩衝液
偵測 Detection
LumiFlash™ Chemiluminescent Substrate, ECL 冷光呈色試劑綜合比較LumiFlash™ Prime Chemiluminescent Substrate, ECL 冷光呈色試劑 (picogram 等級)LumiFlash™ Ultima Chemiluminescent Substrate, ECL 冷光呈色試劑 (low picogram 等級)LumiFlash™ Infinity Chemiluminescent Substrate, ECL 冷光呈色試劑 (high femtogram 等級)LumiFlash™ Femto Chemiluminescent Substrate, ECL 冷光呈色試劑 (low femtogram 等級)
染色 Staining
重新探測 Stripping for Reprobing
