1. 專業 DNA 合成引子製造廠
2. 代理銷售合成引子 (DNA/RNA/Modification)
3. 代理銷售分生實驗及蛋白質實驗試劑 
4. 代理銷售實驗室塑膠耗材 
5. 代理銷售實驗室儀器 
6. 分生專案服務

　　客製化引子合成由 3’-端第一個鹼基開始，根據輸入的序列，由 3’- 端往 5’-端逐一加入下一個鹼基，與自然界 DNA 合成的方向恰巧相反。自動化合成儀中不同的鹼基試劑會放在不同的位置，根據電腦指令執行，將指定的鹼基由獨立的管路注入反應槽中。因此不像自然界以模板合成的 DNA，會發生結合錯誤序列的狀況。然而鹼基加入的結合效率，會受到化學藥劑活性、純度之影響，因此每一生產批次有不同的結合效率。舉例而言，當結合效率為 99%，每 100 條合成的引子，就有 1 條引子無法加上該鹼基，此時下一個化學步驟會將該引子終止合成，因此會發生鹼基缺失 (deletion)。合成的產物其實是混合物，混雜了不同大小的片段，品管之目的即在確定合成引子的片段大小與純度。現行商用合成引子的品管方法有 MASS、PAGE 及 HPLC。 

　　Bioneer 品管系統為 MALDI-TOF MASS以確認合成引子分子量大小，分析誤差介於 0.2%~0.6%，全自動化品管系統可以判斷合成失敗的小片段引子、未完全移除保護基以及酸解造成的嘌呤鹼基脫落等等合成異常之產物。 
百力使用 Denaturing PAGE 分析合成引子的片斷，以 Urea 作為變性劑使合成引子於電泳時維持直線的構形，引子在電泳膠片上的移動距離跟分子大小成反比。輔以分子量標準品即可比對合成引子的片段大小。選用適當濃度的acrylamide gel， 80 mer 以下的合成引子在電泳膠片上的解析度可以達 1 mer。分子量大的合成引子 (45mer 以上)，MASS 分析失去解析度，此時 PAGE 成為較適當比對分子量的工具。 

　　上述兩種品管方法皆可確認合成引子的大小，若要確認合成引子中，完整全長的引子比例，則需要以 HPLC 分析處理。百力的 HPLC 系統為 IP-RP HPLC (ion-pairing reversed-phase HPLC)，管柱藉著吸附在表面上帶正電的 ion-pairing reagent 與引子上帶負電的磷酸根結合而使引子滯留在管柱上，隨後再以疏水性漸增的溶液將引子沖提出來。由於引子與管柱的結合力與引子骨架上的磷酸根數目成正比，引子的長度愈大，滯留時間愈長，因此而得以分離不同大小的引子。流洗液經紫外光偵測器測定在260nm波長的吸光值，經由層析圖分析主要吸收波佔總吸光值比例得到的數值，就是我們用以量化引子純度的依據。 

　　我們的系統對於合成引子的分析結果。標準品中含有兩個長度只差一個鹼基的引子，大小分別是 20 mer 與 21 mer，由層析圖顯示，這套系統可以有效分離這兩條引子，解析度達 1 mer。在實際產品分析時，能夠將正確完整全長以及合成失敗的短鏈產物分開來。藉著這套系統，我們能夠確保顧客得到純度有保障的引子。 

為了符合您全方位的實驗需求，我們提供各式產品如下，請將需求填入訂購表單即可得到適合您的產品。 

根據產品交貨期區分 

一般的 PCR 引子，可考量實驗需求與經費額度選擇兩種產品。 
PURIGO 由百力國內工廠合成，一般PCR引子(50 mer 以內)，隔日可出貨。外縣市依宅配狀況，原則上第三天可到貨。 
BIONEER 一般 PCR 引子 (35 mer 以內)，3 天可出貨。由 Bioneer 全自動化生產純化，每一管引子都以 MALDI-TOF MASS 確認分子量。若貴單位有預算考量，可訂購國外合成產品已儉省實驗經費。 

根據產品純化方式區分 

Desalt 

以膠體過濾法 (G-25 gel filtration) 移除合成反應的副產物 (保護基等小分子有機鹽類，非納鉀等陽離子鹽類)，此種純化方式無法移除合成失敗的小片段產物，因此僅建議使用於一般 PCR 引子。若需要 cloning 實驗，建議至少選擇 OPC 純化。
建議使用：一般 PCR、定序用引子，使用此等級即可。若cloning 實驗引子長度超過 30 mer，仍建議進一步純化為宜。 

OPC

利用疏水性不同的原理， 來分離正確的完整序列以及小片段合成失敗的產物。 可以提高產品正確全長的引子純度。 
其原理為在引子合成的最後一個步驟，執行 DMT-on mode，保留 5'- 端最後一個保護基，這樣形成的引子，其疏水性會大於沒有在 5'- 端保留 DMT group 的小分子失敗片段，在通過特殊的 OPC 管柱後，可以提高完整全長序列的引子純度。然而 OPC 管柱，對於越大分子的鑑別力越差，傳統 OPC 純化管柱當引子長度超過 50 mer 後，其純化力變差。百力研發之 OPC 純化方式，其純化能力可以應用於60 mer 的引子。 
依此方法生產的引子純度可比去鹽純化提高至少 10%。然而，OPC 純化的解析力無法達到 1 mer，因此無法分離正確序列與差一個 mer 合成失敗的片段。
建議使用：30-60 mer 用於 cloning 之引子、定序用引子。 

HPLC

我們的採用 IP-RP HPLC 系統做 HPLC 純化，在 40 mer 以下的解析度可達 1 mer。HPLC 純化之引子皆須通過 PAGE 確認大小以及 HPLC 純度 95% 的品管標準。
建議使用：螢光修飾、Biotin、Thiol 等特殊修飾之引子及純度需求高之實驗如點突變等。

Dual-HPLC

以 IP-RP HPLC 分離疏水性不同的引子。Dual-HPLC 為兩次 HPLC 純化，第一次為 DMT-on 純化模式，純化蒐集到的產物經移除 DMT group 後再進行一次 DMT-off 純化模式，可以更提高產品純度。
建議使用：針對含特定修飾並且長度較長之引子，為提高產品純度，建議採用 Dual-HPLC 純化引子，例如螢光修飾、Biotin、Thiol 等特殊修飾之引子。 

PAGE

以切膠的方式分離出合成的主要產物，建議使用於長鏈引子純化。小片段引子 (<40 mer 效果不佳)。
建議使用：適用於長鏈(大於 80 mer)，且純度要求高的引子。特別推薦用於基因合成以及 RNAi vector design 的實驗設計。 

液態出貨

根據您指定的回溶條件 (濃度、buffer 種類) 回溶引子，可節省您實驗時間並避免實驗室水受到檢體污染造成NTC 訊號，若您無特殊需求，標準的回溶條件如下 
加入滅菌水使引子最終濃度為 100 uM 作為 stock solution 

等莫耳數出貨

引子預設出貨規格為等吸光值(OD)出貨，有時候實驗人員習慣將引子回溶為等莫耳數，為了方便您操作回溶，您可以訂購等莫耳數出貨的引子，每一管引子都有相同的莫耳數，因此回溶相同的體積。舉例而言，一般 20 mer 左右的引子，不同引子序列與排列組合方式會有不同的吸光係數，因此相同的 OD 數會有不同的莫耳數，1 OD 約有 5 nmole 不等。若訂購等 OD 數產量的引子，每一管引子回溶等莫耳濃度時需要加入不同體積的水，尤其在回溶條數多的引子時，會增加研究人員的工作負擔。百力可以提供等莫耳數出貨的服務，讓您可以便利的以相同體積回溶您訂購的引子。

Annealing 雙股黏合服務

1. 應用於 EMSA experiment，construction of shRNA vector
2. 由客戶提供兩股引子序列；若為完全互補，只需提供一股序列，由百力直接轉出互補股。 
3. 建議訂購 HPLC 純化之高純度產品，以確保得到品質良好的雙股序列。 
4. 雙股黏合僅適用於超過 15 mer 之引子，引子長度太短或者 Tm 值偏低 (<40℃)可能無法順利提供雙股黏合良好之引子，請跟我們諮詢。 
5. 生產流程： 


a. 合成單股引子，經純化並確認產品純度良好且兩條單股引子純度一致。 
b. 以等莫耳數混合進行黏合步驟。
c. 以 Native PAGE 確認黏合效率。若效率不佳在 Native PAGE 可見單股殘留或者 smeared band，將判定為品管不合格重新製作。

DNA； 引子合成； 引子； DNA； RNA； Modification； 分生實驗； 蛋白質實驗試劑； 塑膠耗材； 實驗室儀器； 分生； 化學藥劑； MASS； PAGE； HPLC； 電泳； PCR； cloning； 疏水性； 膠體過濾法； 螢光修飾； Biotin； Thiol； 切膠；